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脑脊液单克隆抗体检测癌细胞

百岁啦体检网 • 2016.07.26 10:29

  脑脊液单克隆抗体检测癌细胞

  脑脊液单克隆抗体检测癌细胞简介:脑脊液中恶性细胞有癌细胞、神经外胚层瘤细胞和淋巴瘤细胞。其检测阳性率可达60%。单克隆抗体技术可鉴定恶性细胞的组织来源,有助于癌性脑膜病的早期诊断。

  检查部位:颅脑

  空腹检查:否

  脑脊液单克隆抗体检测癌细胞注意事项

  MCAb具有单一性好,特异性强,纯度高和重复性好等特点。

  脑脊液单克隆抗体检测癌细胞检查过程

  (1)直接荧光抗体法:①抗原基质片(活检组织冰冻切片,被检物直接涂片,培养物涂片等),经无水乙醇或丙酮、甲醇等(要根据实验要求选择固定剂)固定处理后室温晾干。

  ②加荧光标记同属类特异性抗体于基质片上,放湿盒置室温或37℃温箱反应30min~1h。

  ③0.01mol/L pH7.2 PBS缓冲液冲洗15min(换3次PBS)。

  ④pH7.2或pH7.4缓冲甘油封片。

  ⑤荧光显微镜镜检。

  (2)间接荧光抗体法:①抗原(或抗体)基质片(各种组织冰冻切片或培养细胞等)基质片从冰箱取出立即风干。使用前经无水乙醇或丙酮、甲醇等固定剂处理(根据实验要求选择固定剂),一般固定3~15min,室温晾干。

  ②被检物(血清、脑脊液或其他渗出物等),根据需要用PBS适当稀释(1∶5或1∶10)滴于抗原基质片上,置室温或37℃温箱反应30min~1h。

  ③0.01mol/L pH7.2 PBS冲洗15min(更换PBS 3次)。

  ④加荧光标记抗体,置室温或37℃温箱30min~1h。

  ⑤PBS冲洗同③。

  ⑥缓冲甘油(pH7.2)封片,荧光显微镜镜检。

  (3)补体法:①抗原基质片(组织冰冻切片或培养细胞),从冰箱取出立即风干,经无水乙醇或丙酮、甲醇固定3~15min,室温晾干。

  ②被检物(血清或其他),实验前置56℃水浴中30min灭活,冷却后用PBS根据实验要求适当稀释(1∶5或1∶10)。

  ③将上述灭活稀释被检物与新鲜豚鼠血清(生理盐水1∶10稀释)或新鲜正常人血清进行等量混合,滴加在基质片上。置室温或37℃温箱反应30min。

  ④PBS冲洗同(2)-③。

  ⑤滴加荧光标记抗补体抗体于基质片上置室温或37℃温箱反应30min。

  ⑥PBS冲洗同④。

  ⑦缓冲甘油封片,镜检同(2)-⑥。

  (4)双层法、加层法、混合法、补体法,可根据原理示意图,用上述基本法操作即可。

  (5)双重染色法:用于同时示踪两种抗体或抗原,其操作方法同上,只是荧光标记物用两种荧光素标记,一般用异硫氰酸荧光黄(FITC)发黄绿色荧光,另一种是罗丹明B200(RB200)发橙红色荧光,两种标记物可混合应用,也可先后分别应用,在紫外光下可同时被激发,在同一部位发出各自特异标记荧光。

  (6)反衬染色法:在上述荧光染色镜检中,为加强特异荧光与背景的对比度。常用反衬染色的方法,来消除背景荧光,突出特异荧光。常用于反衬染色试剂。有RB200、FITC分别做特异的和非特异的标记,二者混合间接荧光染色法染色以达到特异和非特异反衬目的。另一种试剂是伊文思蓝(Evan blue)它发射与RB200类似的橙红色荧光。使用方法可将FITC荧光染色的标本片,浸入1∶1 000~1∶10000稀释的伊文思蓝溶液中2~5min,取出后用PBS冲洗10min,封片镜检。也可将伊文思蓝以适当的比例与荧光标记抗体溶液混合染色,镜检中可观察到明显衬出FITC黄绿色特异荧光。

  指标解读

  正常值

  阴性

  阳性

  阴性:正常:阴性。                                                                      


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